摘要
细胞外囊泡是一类具有膜结构的异质性囊泡，通过质膜形成（ectosomes）或内吞作用（外泌体）参与细胞间通讯。现有的外泌体研究多集中于体外系统或体液来源的外泌体，而对组织来源外泌体的研究相对匮乏。本研究建立了一种利用细胞类型特异性启动子驱动的报告基因构建体，实现对小鼠皮肤组织特定细胞类型外泌体的靶向标记与后续分离。由于现有分离技术主要依赖尺寸、密度或表面标志物，难以区分外泌体与ectosomes。我们的方法通过基因工程技术实现外泌体特异性标记，使其在异质性细胞外囊泡池中精准识别与分离。分离得到的细胞类型特异性外泌体经过电子显微镜、纳米颗粒追踪分析、抗体外泌体芯片检测等方法验证。整个标记与分离过程耗时2-3天，适用于具备基础实验技能的研究人员。该方案支持从单一种类或联合多种细胞类型中分离外泌体，虽然主要在小鼠创伤边缘皮肤组织中验证，但经适当调整后也可适用于其他组织类型。该方法为探索细胞类型特异性外泌体在细胞间通讯中的功能角色开辟了新途径。
核心要点
- 外泌体（内体来源的细胞外囊泡）作为细胞通讯的重要介质，传统基于尺寸/密度/表面标志物的分离方法难以从异质性囊泡中精准分离。
- 本方案通过组织纳米转染技术将细胞类型特异性启动子驱动的报告基因导入靶细胞，继而通过免疫磁珠分离、酸性缓冲液洗脱和超速离心纯化获得目标外泌体，并采用标准检测方法验证其特性。
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