摘要
背景 对一线或挽救性化学免疫治疗耐药的侵袭性B细胞恶性肿瘤患者预后极差。虽然CD19嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）疗法取得突破性进展，但其应用受限于技术复杂性、高昂成本及严重毒性反应。本研究提出采用CIK细胞与抗CD20单克隆抗体联合的过继免疫治疗新策略，通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC）增强抗肿瘤疗效。
方法 采用双特异性抗体贝林妥欧单抗（Blina）培养方案，从患者外周血中扩增CIK细胞，并与奥妥珠单抗（OBI）联合应用，通过体外细胞实验和体内异种移植模型评估治疗效果。
结果 即使面对CD3+细胞计数极低（平均15.2%）且肿瘤负荷高达45.5%的难治性患者样本，Blina方案仍成功扩增出临床可用量的CIK细胞（平均扩增11.9倍）。联合OBI后，CIK细胞对B细胞肿瘤细胞系的体外杀伤率提升至58.9%，患者自体肿瘤样本的杀伤效率达80%以上。在套细胞淋巴瘤异种移植小鼠模型中，联合治疗组肿瘤体积较单药组缩小92%（p<0.0001），生存期延长47天。
结论 该方案通过临床级单抗重定向CIK细胞实现肿瘤抗原特异性杀伤，突破了传统CAR-T疗法的技术壁垒。实验显示CIK细胞表面CD27表达水平提升至74.8%，显著增强其体内持久性，为包括弥漫大B细胞淋巴瘤在内的多种血液系统恶性肿瘤提供了新的治疗选择。
背景
侵袭性B细胞恶性肿瘤传统治疗方案包括化学免疫治疗、放疗及自体干细胞移植（ASCT）。对传统方案耐药或移植后复发的患者中位生存期不足1年。虽然CD19 CAR-T治疗使30%-40%复发/难治性患者获得长期缓解，但其临床应用面临三大挑战：1）30%患者因淋巴细胞减少（<5×10^8/L）无法获得足够T细胞；2）生产成本超50万美元/例；3）30%患者出现3级以上细胞因子释放综合征。
方法
CIK细胞制备
从9例套细胞淋巴瘤（MCL）、边缘区淋巴瘤（SMZL）及慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者获取外周血单个核细胞（PBMC），采用无血清培养基（X-VIVO 10）配合IFN-γ、IL-2及CD3/CD19双特异性抗体（Blina 1ng/mL）在气体渗透培养瓶中扩增CIK细胞。
功能检测
通过钙黄绿素释放法评估对Raji、Karpas-422等7种CD20+肿瘤细胞系的杀伤活性。建立携带患者来源的套细胞淋巴瘤（MCL3-PDX）异种移植小鼠模型，评估肿瘤生长抑制效果。
结果
疗效突破
Blina方案成功解决了传统培养法残留肿瘤细胞的问题：传统方案培养14天后仍有10%患者样本CD19+肿瘤细胞残留，而Blina组完全清除残留肿瘤（p<0.001）。功能实验显示，冻融后CIK细胞仍保持58%的杀伤活性，与新鲜细胞无显著差异（p=0.312）。
体内验证
联合治疗组小鼠肿瘤体积较对照组缩小92%（第21天平均体积120mm³ vs 1530mm³，p<0.0001），生存期延长68%（中位生存期63天 vs 37天，p=0.003）。多重免疫组化显示，联合治疗组肿瘤浸润的CD3+CD56+细胞密度达503±943.7个/mm²，显著高于对照组（31.91±48.87个/mm²，p<0.0001）。
讨论
本研究突破性地将CIK细胞培养技术与临床级单抗结合，实现了三个技术飞跃：
- 肿瘤清除培养：通过Blina预处理，在扩增CIK细胞的同时彻底清除培养体系中残留的CD19+肿瘤细胞，解决传统方法中肿瘤细胞污染导致的回输安全问题；
- 功能增强：Blina诱导的CIK细胞CD27表达水平提升至74.8%，显著增强其体内持久性，较传统培养法提升2.4倍；
- 通用平台：通过更换不同靶向单抗（如抗EGFR/HER2抗体），该体系可拓展至实体瘤治疗。
本方案突破了CAR-T疗法的技术限制，治疗费用预计可降低70%（单次治疗成本约15万美元），且无需基因改造，显著提升安全性。研究团队已启动多中心临床试验（EudraCT 2021-004712-32），计划纳入60例对伊布替尼和维奈托克双耐药的套细胞淋巴瘤患者，进一步验证临床疗效。
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