什么是外泌体？
外泌体是细胞外囊泡（EVs）的一个子集，由所有细胞类型在体外和体内自然释放。细胞外囊泡包括凋亡小体、微颗粒、肿瘤体、微囊泡、外切体和外泌体等多种类型。
这些亚型主要根据生物合成途径分类，也可通过大小、携带物质或细胞来源进行区分。例如：
- 凋亡小体（1-5μm）形成于细胞凋亡过程，特征是磷脂酰丝氨酸外化并可能携带DNA片段
- 微囊泡（100-1000nm）直接从质膜出芽形成
- 外泌体（30-150nm）通过多囊泡体（MVBs）胞吐释放
图1显示：微囊泡直接从健康细胞质膜分泌，凋亡小体来自凋亡细胞，而外泌体通过内体系统复杂过程释放。
细胞外囊泡与外泌体的生物合成
细胞外囊泡在细胞间通讯中发挥核心作用，通过传递蛋白质、脂质和核酸等生物活性分子影响邻近或远距离靶细胞。
微囊泡形成机制涉及质膜分子重组：
- 脂质成分改变导致磷脂酰丝氨酸暴露
- 钙离子浓度变化引发膜弯曲
- 肌动蛋白细胞骨架重构促进出芽
外泌体生物合成则通过：
- 内体形成多囊泡体
- 多囊泡体外膜与质膜融合
- 释放30-150nm外泌体
RAB家族GTP酶蛋白在分泌调控中起关键作用，其缺失可显著降低外泌体产量，但调控机制具有细胞类型依赖性。
外泌体术语规范
根据国际细胞外囊泡学会（ISEV）指南：
- "外泌体"应统一称为"细胞外囊泡"
- 按物理特性命名更科学：
- 小囊泡（sEV，<200nm）
- 中/大囊泡（mEV/LlV，>200nm）
- 密度分级（高/低密度EV）
- 生化标记（如CD63+CD81+ EV）
研究发现传统"外泌体标志物"（如flotillin-1、HS70）广泛存在于各类囊泡中，只有Syntenin-1和TSG101可特异性标记四跨膜蛋白富集的小囊泡。
外泌体功能解析
sEV在再生医学中的核心作用体现在：
- 组织再生：心脏（19）、肾脏（20）、肝脏（21）、皮肤（22）、大脑（23）修复
- 细胞调控：促进迁移增殖（24）、血管生成（24,25）、免疫抑制（26）
- 疾病标志物：通过蛋白质和miRNA谱诊断癌症（29,30）
相比干细胞疗法，sEV治疗优势显著：
✓ 无免疫排斥风险
✓ 室温可保存
✓ 靶向性强
✓ 无肿瘤形成风险
分离纯化与质控标准
外泌体分离应满足：
- 蛋白质污染率<1×10^9粒子/μg（P:P比）
- 标准化流程：
- 差速超速离心
- 切向流过滤（TFF）
- 尺寸排阻色谱（SEC）
ISEV 2018指南要求：
✓ 提供EV来源（血液/尿液/条件培养基）
✓ 3种以上sEV富集蛋白检测
✓ 粒径分布分析（NTA/DLS/RPS）
✓ 功能验证（剂量效应关系）
供应商质控12问
- 培养过程中是否使用血清？
▶ 使用化学定义培养基避免外源污染
- 细胞来源及选择依据？
▶ 骨髓间充质干细胞（BM-MSC）、脐带MSC（UC-MSC）、脂肪MSC（AD-MSC）均具抗炎再生功能
- 采用何种纯化方法？
▶ 优先选择TFF+SEC组合方案
- 如何检测纯度？
▶ P:P比>1×10^9为合格标准
- 如何维持完整性？
▶ 使用海藻糖保护膜结构
- 贮存运输条件？
▶ 同一设施完成生产运输
- 是否进行功能验证？
▶ 使用皮肤成纤维细胞/角质形成细胞进行体外定量测试
结论
在再生美容领域，外泌体通过促进细胞迁移、血管生成及抗炎作用展现出替代传统细胞疗法的潜力。要充分发挥其治疗价值，需严格遵循：
- 标准化命名与质控流程
- 纯度/完整性/功能三重验证
- 全温控贮存运输体系
临床工作者通过系统质控问题评估产品，确保外泌体疗法在组织再生、抗衰老应用中的安全性和有效性。随着研究深入和技术规范完善，外泌体将引领再生医学进入非侵入式治疗新纪元。
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