心力衰竭组织中circIGF1R的鉴定及其环状构象验证
通过对心力衰竭（HF）患者左心室组织进行RNA测序，发现86,406个circRNA转录本中，circIGF1R（hsa_circ_0005035）显著上调。采用反向引物PCR扩增验证其环状结构，琼脂糖凝胶电泳和桑格测序确认了其封闭环状结构。通过RNase R消化实验和放线菌素D处理发现，circIGF1R比线性mRNA（如IGF1R）具有更强的稳定性，半衰期更长。
circIGF1R在HF相关心脏成纤维细胞中高度保守且低表达
circIGF1R来源于IGF1R基因第二外显子，在人、猪、小鼠和大鼠等物种中保守性超过89%。在小鼠主动脉缩窄（TAC）模型中，circIgf1r在心脏整体组织表达上调，但在分离的心脏成纤维细胞中表达显著降低。荧光原位杂交（RNA-FISH）结合α-SMA染色显示，circIGF1R在成纤维细胞胞浆中特异性定位。
circIGF1R沉默促进心脏成纤维细胞增殖
通过设计靶向circIGF1R剪接位点的siRNA，在人心脏成纤维细胞（HCFs）中实现特异性敲低。实验显示，circIGF1R沉默显著增强细胞增殖：WST-1检测显示代谢活性增加，CFSE荧光稀释实验显示细胞分裂加速，BrdU掺入量上升35%，Ki67阳性细胞核比例增加2.1倍。
circIGF1R调控糖酵解活性影响细胞增殖
circIGF1R敲低导致基础质子逸出率（glycoPER）增加42%，糖酵解能力提升38%，乳酸分泌增加55%，葡萄糖摄取增加47%。同位素追踪显示，13C标记的丙酮酸（M3）、乳酸（M3）和丙氨酸（M3）丰度分别增加2.3、1.8和1.6倍。TCA循环中间体（如柠檬酸M2/M4）比值升高，而抑制糖酵解（2-DG处理）可完全阻断circIGF1R沉默的促增殖效应。
circIGF1R模拟物抑制HF成纤维细胞病理性增殖
通过体外转录获得circIGF1R模拟物，在HF患者来源的HCFs中过表达后：
- WST-1活性降低32%
- CFSE荧光强度增加2.5倍
- BrdU掺入量减少40%
- Ki67阳性细胞核比例下降58%
但在非衰竭心肌细胞中未见明显增殖抑制，显示其对病理状态的选择性作用。
AZGP1介导circIGF1R的代谢调控机制
通过RNA pulldown结合质谱分析，发现AZGP1是circIGF1R的关键互作蛋白：
- circIGF1R过表达使AZGP1蛋白水平上调2.8倍
- AZGP1敲低完全逆转circIGF1R对糖酵解（glycoPER下降37%）和增殖（BrdU掺入恢复至对照组水平）的抑制作用
- 互作验证：Western Blot显示circIGF1R探针组AZGP1富集度比对照组高4.2倍
临床转化意义
该研究揭示了circIGF1R-AZGP1轴通过调节糖代谢影响心脏纤维化的新型机制：
- circIGF1R在HF患者成纤维细胞中低表达
- 其缺失导致糖酵解增强（乳酸分泌+55%）
- 通过AZGP1靶向干预可逆转病理性增殖
这为开发针对circIGF1R或AZGP1的抗纤维化疗法提供了理论基础。
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