阿尔茨海默病（AD）的诊断正在快速发展，这源于对更早、更可靠且更易获取的检测方法的迫切需求。
随着单克隆抗体疗法如lecanemab（商品名：Leqembi®）和donanemab（Kisunla™）的近期批准，准确的临床前和早期AD诊断的临床需求已显著增强。
传统的诊断方式——脑脊液（CSF）神经化学痴呆诊断和淀粉样蛋白-PET成像——虽然有效，但由于侵入性、成本和操作限制，不适合大规模筛查。这促使了血液生物标志物的开发，这些标志物有望彻底改变早期AD检测和患者分层，以便进行预防性治疗。
该领域的一项关键技术进步是在高灵敏度免疫测定（IA）之前使用免疫沉淀（IP）作为预处理步骤，统称为IP-IA。这种方法通过富集目标蛋白和清除干扰基质成分，提高了低丰度生物标志物的检测能力，并改善了诊断准确性。
本综述评估了IP-IA平台在血液生物标志物方面的临床相关性、方法学创新和诊断性能，重点关注其在早期和临床前疾病阶段的应用。
临床背景和血液生物标志物的需求
针对早期AD的疾病修饰单克隆抗体的批准，已将诊断范式转向识别处于疾病最早阶段的患者——在显著认知能力下降和不可逆神经退行性变发生之前。
根据Jack 等人定义的AD连续体，其范围从临床前阶段（0-3）到临床痴呆（阶段4-6）。早期临床前AD（阶段1-2）表现为无明显症状的细微分子变化，而早期症状性AD（阶段3和早期痴呆）则表现为轻度认知障碍（MCI）和功能下降。
目前的金标准诊断方法，如CSF生物标志物分析和淀粉样蛋白-PET，不适合人群水平的筛查。血液生物标志物，特别是反映淀粉样蛋白-β（Aβ）和tau病理的标志物，正成为实用的替代方案。然而，挑战在于实现在最早疾病阶段足够的敏感性和特异性。
AD连续体中的生物标志物动态
AD中最早可检测到的生物标志物变化是脑脊液Aβ42的减少，特别是Aβ42/Aβ40比率。这种变化在血液中得到反映，与脑脊液变化同时发生。其他生物标志物，如磷酸化tau亚型（特别是p-tau217和p-tau181），在疾病后期上升。重要的是，一些具有主观认知缺陷或早期MCI的患者可能不会显示病理性的淀粉样蛋白-PET或tau-PET结果，这凸显了对敏感血液检测方法的需求。
方法学创新：IP-IA平台
IP-IA方法结合了机器人IP和高通量免疫测定。初始IP步骤使用功能化磁珠和针对诊断蛋白（Aβ肽，tau蛋白）的抗体，富集生物标志物并去除可能掩盖表位或干扰检测的基质成分。
一种涉及热变性和非电荷洗涤剂的新型稀释技术，通过利用Aβ和tau蛋白的物理化学特性，进一步增强了检测性能。
IP后，洗脱液使用商业免疫测定平台（例如ELISA、MesoScale、Simoa、Lumipulse、Elecsys）进行分析，能够从最小血浆体积（低至100微升）中进行Aβ和tau表位的多重检测。这对大型队列研究和珍贵样本集特别有利。
诊断性能和用例
多项研究表明，与直接检测相比，IP-IA显著提高了血液Aβ和tau测量的诊断准确性。
例如，在与罗氏诊断（Roche Diagnostics）的合作中，前期IP将Aβ42/Aβ40比率检测的曲线下面积（AUC）从0.73提高到0.88，而在生物标志物支持的临床诊断下进一步提高到0.92。
复合生物标志物评分，如AT术语（结合Aβ比率和磷酸化tau水平），进一步提高了诊断性能。在大型多中心队列（例如德国DZNE Delcode研究）中，使用IP-IA数据的逻辑回归模型在CSF验证的AD诊断中达到了高达0.97的AUC，敏感性和特异性超过90%。
这些检测可以可靠地识别认知功能未受损但高风险的个体（Jack 1期），在临床痴呆发作前数十年。
使用标准化效应大小（Cohen's d, Cliff's delta）的统计分析证实，IP-IA平台在早期临床前AD和对照组之间提供稳健的区分，效应大小和诊断准确性与直接测量相当或超过直接测量，特别是对于磷酸化tau217。
多参数方法和生物见解
最近的研究强调了多参数生物标志物策略的重要性。虽然磷酸化tau217是早期症状性AD的高度特异性标志物，但它在临床前阶段的敏感性与Aβ42/Aβ40比率相当。此外，磷酸化tau217的升高可能来自非脑源（例如肌萎缩侧索硬化症中的肌肉），这表明需要Aβ和tau标志物的组合才能进行可靠的早期诊断。
使用双阈值策略（定义灰色区域以进行进一步测试）和复合评分（例如AT术语）可以实现细致的患者分层并最小化诊断不确定性。随着血液检测方法逐渐用于常规使用，这些方法对临床决策至关重要。
结论
免疫沉淀增强型免疫测定平台（IP-IA）代表了在寻求可访问、准确和早期阿尔茨海默病诊断方面的重大进展。通过富集目标生物标志物和清除基质干扰，IP-IA能够从最小血液量中敏感地检测Aβ和tau蛋白，促进大规模筛查和纵向研究。
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