溶酶体通过TRPML1释放钙离子调控心肌梗死后心室心律失常 - 心脑血管

摘要

背景：

在非缺血性心肌病中，线粒体钙处理通过调节肌浆网(SR)舒张期钙释放参与心律失常的发生。最近有报道称，溶酶体钙释放可触发肌浆网钙释放。我们研究了溶酶体通过瞬时受体电位粘脂蛋白1(TRPML1)通道的钙通量是否可通过引起舒张期肌浆网钙释放，从而导致缺血性心肌病相关心律失常。

方法：

通过结扎左前降冠状动脉，在野生型C57BL/6J和TRPML1杂合敲降(TRPML1±)小鼠中诱导缺血性心肌病。在心肌梗死(MI)后3周对小鼠进行研究。

结果：

心肌梗死后，人类缺血性或非缺血性心肌病患者溶酶体限制性TRPML1钙释放通道显著增加。在小鼠心肌梗死边缘区，TRPML1而非TPC2(二孔通道2)显著上调85%，在远端区域上调55%。心肌梗死后，溶酶体数量增加并与肌浆网更接近。与假手术心肌细胞相比，心肌梗死小鼠心肌细胞中溶酶体钙释放显著上调。心肌梗死小鼠分离的心肌细胞中动作电位持续时间延长，舒张期肌浆网钙释放增加。在心肌梗死小鼠分离的心肌细胞中，阻断TRPML1可减少动作电位持续时间延长，并抑制早期和延迟后除极；而TRPML1激动剂则增加了TRPML1依赖性细胞触发活动。TRPML1拮抗剂可抑制心肌梗死小鼠诱导的心室颤动。与此结果一致，TRPML1基因敲降可抑制心肌梗死后的心律失常风险。TRPML1靶向药物的效果在对照心肌细胞中未观察到。

结论：

由于数量增加、与肌浆网接近以及TRPML1依赖性溶酶体钙释放介导的舒张期肌浆网钙释放，溶酶体在心肌梗死后增加了心律失常风险。

已知内容

• 线粒体钙通量可导致非缺血性心肌病的心律失常风险。

• TRPML1(瞬时受体电位粘脂蛋白1)在心肌细胞以外的细胞类型中可诱导内质网/肌浆网钙释放。

本研究新增内容

• 缺血性心肌病患者TRPML1表达增加。小鼠心肌梗死(MI)后TRPML1蛋白和溶酶体数量增加。

• 心肌梗死导致小鼠心肌细胞中溶酶体-肌浆网接触增加。

• TRPML1增强的钙释放诱导了心肌梗死小鼠心肌细胞中舒张期肌浆网钙释放。

• 抑制TRPML1激活减少了心肌梗死后舒张期肌浆网钙释放、动作电位持续时间延长、触发活动(TA)和心律失常。

• 靶向TRPML1激活或减少心肌梗死后溶酶体钙外流可能代表预防心律失常风险的新治疗靶点。

心肌梗死(MI)和心肌收缩功能下降导致心律失常风险增加。虽然心律失常的原因在很大程度上尚不清楚，但已知多种因素如ATP、酸中毒、[Ca2+]i等离子积累、自由基增加、儿茶酚胺释放、动作电位(AP)改变以及缺血组织的机械特性改变都可能参与其中。缺血的心肌梗死边缘区(BZ)似乎是这些变化和相关心律失常发生的主要部位。

由于机制尚不明确，心律失常治疗主要依赖植入式心律转复除颤器，但其应用受到难以确定哪些患者能从植入中获益的限制。目前尚无抗心律失常药物被证明能有效预防缺血性心肌病患者恶性心律失常和延长生命。

心脏心律失常有3种基本细胞机制：异常自律性、触发活动(TA)和折返。前两种机制依赖于钙离子，通常为局灶性，从单一位置开始，而折返涉及持续电活动，易受传导缓慢和动作电位改变的影响。所有这三种机制都与心肌梗死后心律失常有关，但它们的重要性排序尚不清楚，也不知道哪种机制最重要。有研究表明，局灶机制可能启动由折返传播的心律失常。由于对这些基本机制的重要性和关系存在不确定性，新的治疗方法发展缓慢。我们曾发表文章称抑制TRPML1(瞬时受体电位粘脂蛋白1)可减少心肌梗死中的异常自律性，而TRPML1与心肌梗死中触发活动的关系是本研究的主题。

最近，我们提出了一种新概念，即摄取和释放钙的细胞器可能在心肌病中而非正常心脏中贡献心律失常风险。具体而言，我们证明线粒体钙内流可导致非缺血性心肌病的心律失常风险，抑制线粒体钙内流可防止动作电位延长、触发活动和心律失常。线粒体贡献心律失常风险的能力取决于：(1)细胞器钙摄取和释放，特别是在心肌病期间；(2)线粒体和肌浆网的接近，形成微区；(3)线粒体舒张期钙释放对肌浆网钙释放的放大；(4)舒张期钠钙交换电流增加。因此，调节线粒体钙通量代表了心肌病中一种潜在的新型抗心律失常方法。

心脏溶酶体可能以类似于线粒体的方式在心肌病期间贡献心律失常风险。心脏溶酶体最广为人知的是其降解作用，但它们具备上述参与心律失常风险的4个标准。它们维持约500 μmol/L的腔内游离钙浓度。溶酶体跨膜电位假定腔内侧为正(> +30 mV)，这为阳离子从溶酶体腔向胞质流出提供了驱动力。在心肌病中，溶酶体活性和与肌浆网的相互作用增加。最后，溶酶体钙释放可在非心脏组织中触发舒张期肌浆网钙释放。

溶酶体钙通过与H+/Ca2+交换器偶联的液泡(V)型H+-ATPase维持相对于胞质的高水平，而钙释放则由TPC2(二孔通道2)和TRPML1介导。TRPML1是定位于晚期内体和溶酶体膜上的钙通透性非选择性阳离子通道，不存在或功能性地存在于质膜上。TRPML1被认为是溶酶体中的主要钙释放通道。此外，活性氧激活TRPML1(也称为MCOLN1)，而活性氧在缺血性心肌病中升高。最后，TRPML1转录依赖于TFEB(转录因子EB)。TFEB去磷酸化并随后转位到细胞核导致溶酶体生物发生和TRPML1转录增加。因此，我们检验了溶酶体通过增加数量、接近肌浆网、通过TRPML1释放钙、增强舒张期肌浆网钙释放并导致触发活动来增加缺血性心肌病心律失常风险的假设。

方法

支持本研究结果的数据可根据合理要求从通讯作者处获取。随机选择任一性别的小鼠用于治疗或假手术组。观察者对治疗组不知情。所有动物方案均符合明尼苏达大学动物护理和使用委员会的指南，并符合国家卫生研究院出版的《实验动物护理和使用指南》。人类组织样本和去标识患者信息由明尼苏达大学机构审查委员会批准的集中式人类标本采购计划——生物材料采购网络获取。方法的完整描述可在补充材料中获得。

缺血性心肌病模型

通过冠状动脉闭塞在11-12周龄小鼠(25-35 g，任一性别)中诱导心肌梗死。这种方法导致左心室约33%发生心肌梗死(通过TTC染色)，射血分数相对降低46%。

心肌细胞分离和纯化

如前所述分离心室心肌细胞。通过基于免疫磁珠的巨噬细胞耗竭进一步纯化成人的心肌细胞。

电生理记录

使用Axopatch-200B放大器(Molecular Devices, Foster City, CA)通过破裂全细胞电流钳技术记录动作电位。

电子显微镜

如前所述记录小鼠心脏的电子显微镜图像。

邻近连接测定

如文献所述进行邻近连接测定。

体内心脏电生理

如前所述进行心内电生理研究。

蛋白印迹分析

使用常规蛋白印迹评估心肌梗死小鼠和人类左心室游离壁组织中的蛋白表达。

免疫荧光染色

如已发表文献所述进行TRPML1、TFEB和LAMP1免疫荧光染色，并通过共聚焦显微镜(Olympus Fluoview FV3000, Tokyo, Japan)获取图像。

细胞内钙瞬变测量

使用IonOptix系统(IonOptix LLC, Milton, MA)可视化细胞内钙瞬变的变化。

溶酶体钙释放测量

如前所述使用GCaMP7-ML1构建体对溶酶体钙释放进行成像。

左心室心肌细胞记录的钙火花图像

所使用的方法已先前描述。

统计分析

数据以平均值±标准误表示。如文中所述，使用Fisher精确检验、χ2检验、Mann-Whitney U检验和双样本t检验进行统计分析。在单因素或嵌套方差分析的多重比较中使用Bonferroni校正。P<0.05被认为具有统计学意义。

结果

心肌梗死后小鼠和人类溶酶体钙处理蛋白TRPML1增加

TRPML1和TPC2是溶酶体钙释放通道。在小鼠中，TRPML1而非TPC2在心肌梗死心脏边缘区组织中显著上调85%，在远端区域上调55%。TPC2在边缘区显著降低49%，在远端区域无明显变化(图1A和1B)。为确保表达更多TRPML1的巨噬细胞未改变结果，我们研究了巨噬细胞耗竭的分离心肌细胞。在分离的心肌细胞中，心肌梗死小鼠边缘区TRPML1蛋白水平增加50%，与心脏心室组织结果一致(图S1)。此外，与假手术小鼠相比，心肌梗死小鼠心脏边缘区细胞质蛋白水平的转录调节因子p-TFEB显著降低(图1C)，表明心肌梗死小鼠心脏边缘区细胞核中去磷酸化TFEB更多。这些数据与先前报道一致，即激活的TRPML1通道触发TFEB核转位(即增加去磷酸化TFEB)，导致溶酶体生物发生增加。此外，与对照心室相比，缺血性或非缺血性心肌病患者的人类心室组织中TRPML1增加(图1D)，而缺血性心肌病患者对照和心室组织之间的TPC2蛋白水平无变化(图S2)。因此，我们在后续实验中重点关注TRPML1。

图1. 心肌梗死中TRPML1(瞬时受体电位粘脂蛋白1)增加。(A) TRPML1在心肌梗死小鼠心脏的边缘区(BZ)和远端区均显著增加。(B) TPC2(二孔通道2)在心肌梗死小鼠心脏中下调。(C) TFEB(转录因子EB)磷酸化减少(即TFEB去磷酸化增加)在心肌梗死小鼠心脏边缘区。(D) TRPML1在非缺血性心肌病(NI-CM)和缺血性心肌病(I-CM)人类左心室中显著上调。数据以平均值±标准误表示。RZ表示远端区。P<0.05，通过Mann-Whitney U检验比较两组。

心肌梗死后溶酶体数量和与肌浆网接近程度增加

如上所述，溶酶体产生和TRPML1转录受主转录调节因子TFEB控制。当TFEB去磷酸化时，它重新定位到细胞核以增加溶酶体产生。心肌梗死后，核TFEB蛋白(去磷酸化TFEB)增加，分离的心肌细胞中LAMP1标记的溶酶体增加(P<0.05；图2D、2E和2F)。如预期，TRPML1与溶酶体标记物LAMP1共定位(图2A至2C)。

图2. 从心肌梗死小鼠心脏分离的心肌细胞中溶酶体(LAMP1)、TRPML1(瞬时受体电位粘脂蛋白1)和核TFEB(转录因子EB)增加。(A)和(B)分别从假手术和心肌梗死边缘区(BZ)分离的心肌细胞中LAMP1和TRPML1的蛋白表达。(C)A和B的合并。(D)TFEB(绿色)和(E)TFEB(绿色)与4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI；蓝色)的合并。A、B和E中的蓝色插图是阴性对照图像。C中的灰色插图是每张图像中白色框的放大区域。(F) LAMP1 (AB2971; Sigma-Aldrich)、TRPML1 (ACC-081; Alomone)和核TFEB (n-FEFB; Ptglab 13372-1-AP)表达的总结。数据以平均值±标准误表示。每组n=9，来自每组3只小鼠。比例尺，20 μm。P<0.05，通过双样本t检验比较两组。

电子显微镜显示溶酶体位于肌浆网附近，溶酶体和肌浆网之间的最短距离从假手术组的33.0±4.9 nm减少到心肌梗死组的9.1±2.5 nm(图3A和3B；P<0.05；每组n=10)。如预期，溶酶体与连接或非连接肌浆网之间的最近距离显著缩短(图3B；每组n=5)。连接肌浆网定义为在二联体空间面向T小管的终池肌浆网区域。

图3. 心肌梗死小鼠中肌浆网(SR)-溶酶体接触增加。(A) 来自假手术和心肌梗死小鼠心脏的电子显微镜图像。(B) A中溶酶体和肌浆网之间最近距离的总结。n=10。连接肌浆网(jSR)是面向二联体空间T小管的终池肌浆网区域(n=5)。(C) 从心肌梗死小鼠分离的假手术和心肌梗死心肌细胞中的邻近连接测定(PLA)信号。比例尺，20 μm。C中的蓝色插图是DAPI的阴性对照图像。假手术和心肌梗死边缘区(BZ)分别为n=7和8。每组有3只小鼠。数据以平均值±标准误表示。njSR表示非连接肌浆网(n=5)。P<0.05，通过双样本t检验比较两组。

TRPML1已知在平滑肌细胞中形成复合物并激活RyR2。我们用邻近连接测定调查RyR2和TRPML1是否在心脏中紧密接近，发现与假手术组相比，心肌梗死后它们的接近程度增加(图3C)。

心肌梗死增强溶酶体钙释放

要使溶酶体影响肌浆网，它们必须释放钙，进一步通过激活RyR2诱导肌浆网释放钙。GCaMP7-TRPML1是直接与TRPML1偶联的溶酶体钙特异性和pH不敏感荧光传感器。先前已有报道称使用此探针特异性测量溶酶体TRPML1钙释放。我们在此探针中过表达小鼠。如前所述，该探针不检测小的肌浆网钙释放，并且当使用此探针时避免了大肌浆网钙释放的诱导。荧光探针显示，除了TRPML1蛋白水平增加外，溶酶体基础钙释放和TRPML1激动剂诱导的(ML-SA1，500 nmol/L)钙释放在心肌梗死后似乎增加(图4A和4B)。转染对照构建体的心肌梗死小鼠未显示显著荧光。

图4. 心肌梗死后溶酶体钙释放增加。(A) 典型的溶酶体钙释放轨迹。使用慢病毒转染GCaMP7-ML1小鼠。与假手术心肌细胞(CMs)相比，转染慢病毒GCaMP7-ML1的心肌梗死小鼠似乎具有更多基础溶酶体钙释放，并且TRPML1(瞬时受体电位粘脂蛋白1)选择性激动剂ML-SA1(0.5 μmol/L)可增加溶酶体钙释放；浴液中含5 mmol/L EGTA(无钙台氏液)以最小化任何其他潜在的钙释放来源。F0定义为无细胞区域的背景荧光。(B) A的总结。数据以平均值±标准误表示。使用Bonferroni校正。假手术(GCaMP7-ML1)和心肌梗死(GCaMP7-ML1)的CMs分别为n=13和10。CMs来自每组3只小鼠。P<0.05，通过双因素方差分析比较两组。

TRPML1依赖性溶酶体钙释放导致舒张期肌浆网钙释放

心肌梗死小鼠的心肌细胞中舒张期肌浆网钙释放增加(图5A和5B)。如预期，溶酶体钙释放对肌浆网钙释放的贡献，舒张期肌浆网钙火花被TRPML1选择性拮抗剂ML-SI1(1 μmol/L)抑制，而在心肌梗死心肌细胞中被TRPML1选择性激动剂ML-SA1(500 nmol/L)增加(图5B)。如我们假设的那样，溶酶体仅在心肌病状态下对心律失常起作用，激动剂对从心肌梗死假手术小鼠分离的心肌细胞中的钙火花无影响。在添加ML-SA1(500 nmol/L)前后均未检测到钙火花(图5A)。可能是因为在对照条件下溶酶体数量较低，溶酶体钙释放较小，空间溶酶体-肌浆网分离较大。为证明观察到的钙火花来自肌浆网，使用了肌浆网钙ATP酶抑制剂噻苯咪唑(1 μmol/L)和高浓度的雷尼丁(10 μmol/L)来抑制肌浆网钙释放通道。每种药物均阻止了从心肌梗死小鼠分离的心肌细胞中TRPML1依赖性钙火花(图5C和5D)。这些结果表明溶酶体钙释放通过诱导肌浆网钙释放发挥作用。如预期，由于溶酶体钙释放量小，抑制TRPML1对从心肌梗死小鼠心肌细胞记录的钙瞬变无影响(图S4)。

图5. 从假手术和心肌梗死(MI)小鼠分离的心肌细胞(CMs)中TRPML1(瞬时受体电位粘脂蛋白1)诱导的钙火花。(A) 在向假手术CMs施用ML-SA1(TRPML1选择性激动剂)前后记录的钙火花。两组均未检测到火花；每组n=10。(B) 向从心肌梗死小鼠分离的CMs施用ML-SI1(1 μmol/L)和ML-SA1(0.5 μmol/L)或ML-SI1(1 μmol/L)后跟ML-SA1(0.5 μmol/L)2分钟获得的钙火花。(C)和(D) 在通过SERCA2选择性抑制剂(噻苯咪唑，1 μmol/L，15分钟)抑制肌浆网(SR)钙装载或通过RyR2阻滞剂雷尼丁(10 μmol/L，30分钟)阻断SR钙释放后，0.5 μmol/L ML-SA1不再诱导从心肌梗死小鼠分离的CMs中的钙火花。(E) A至D的总结。数据以平均值±标准误表示。每组n=10(细胞数)，来自每组3只小鼠。火花振幅不受任何干预影响。假手术、噻苯咪唑和雷尼丁组未在F中绘制，因为未检测到火花。P<0.05，比较两组。††P<0.01，与其他组比较，通过双样本t检验。

溶酶体钙释放在心肌梗死后导致心律失常风险

心肌梗死已知会导致触发活动和心律失常。触发活动由异常舒张期肌浆网钙释放引起。导致钙波的钙火花可能通过增加瞬态内向电流(钠钙交换电流)引发触发活动。如上所示，TRPML1在心肌梗死心肌细胞中引起舒张期肌浆网钙释放。因此，我们测试了TRPML1是否通过增加舒张期肌浆网钙火花，在心肌梗死后导致细胞触发活动。

如预期，从心肌梗死心脏分离的心肌细胞显示早期后除极和延迟后除极，而在心肌梗死假手术心肌细胞中无触发活动(图6A和6B)。通过施用1 μmol/L ML-SI1 2分钟阻断TRPML1，抑制了从心肌梗死小鼠分离的心肌细胞中的早期后除极和延迟后除极(图6B和6D)。相反，通过0.5 μmol/L ML-SA1增加TRPML1活性增强了触发活动(图6C和6D)。与溶酶体钙通量仅在心肌梗死后导致心律失常的假设一致，抑制TRPML1对从假手术小鼠心肌细胞记录的动作电位无影响(图6A)。

图6. 阻断TRPML1(瞬时受体电位粘脂蛋白1)抑制小鼠心肌梗死(MI)心肌细胞(CMs)中的触发活动，而激活TRPML1增加触发活动。(A) 在向从假手术小鼠分离的CMs施用0.5 μmol/L ML-SA1(TRPML1特异性激动剂)前后记录的典型动作电位(APs)。每组重复10个细胞。(B) 在向从心肌梗死小鼠分离的CMs施用1 μmol/L ML-SI1(TRPML1特异性拮抗剂)前后获得的动作电位。(C) 在向从心肌梗死小鼠分离的CMs施用TRPML1特异性激动剂0.5 μmol/L ML-SA1后记录的典型动作电位。(D) B和C的总结。数据以平均值±标准误表示。每组n=10(细胞数)，来自每组3只小鼠。P<0.05和***P<0.01，通过χ2检验比较两组。

在全动物实验中，选择性TRPML1阻滞剂ML-SI1(0.15 mg/kg，腹腔注射)可显著减少心肌梗死小鼠中诱导的心室颤动发作(图7)。TRPML1的基因减少导致心肌梗死后可诱导心律失常的相同减少，验证了ML-SI1对TRPML1通道的体内选择性。与野生型心肌梗死小鼠边缘区相比，TRPML1±心肌梗死小鼠边缘区心脏组织中的TRPML1蛋白水平显著降低(图S5)。与野生型心肌梗死小鼠相比，TRPML1±心肌梗死小鼠中诱导的心室颤动发作减少(图7)。

图7. 药理学和基因抑制TRPML1(瞬时受体电位粘脂蛋白1)均减少心肌梗死(MI)小鼠中室性心律失常的可诱导性。(A) 通过起搏诱导的ECG记录。将ML-SI1(TRPML1选择性拮抗剂，0.15 mg/kg，腹腔注射)注射到心肌梗死小鼠中。(B) A的总结。P<0.05和***P<0.01，通过Fisher精确检验比较两组。每组有6只小鼠。VF表示心室颤动；WT表示野生型。

讨论

我们假设心肌梗死后的心律失常至少部分由钙循环细胞器(如线粒体和溶酶体)的舒张期小钙释放引发。这些细胞器对心律失常风险的贡献在心肌病中被肌浆网放大，因为细胞器数量增加、细胞器与肌浆网接近程度增加、细胞器钙释放增加、舒张期肌浆网钙释放增加以及早期后除极和延迟后除极介导的触发活动增强。当前数据证明了溶酶体在产生触发活动中的新作用。

在这些实验中，我们表明小鼠TRPML1(溶酶体钙释放通道)蛋白表达增加，溶酶体主转录调节因子被激活，溶酶体数量增加，溶酶体与肌浆网的接近程度增强，心肌梗死后TRPML1溶酶体钙释放增加。TRPML1表达在人类心肌病心室中也增加，验证了我们发现对人类的临床相关性。TRPML1主要位于所有哺乳动物细胞类型中晚期内体和溶酶体的膜上。TRPML1与肌浆网中RyR2的接近程度增加，意味着心肌梗死后溶酶体和肌浆网之间微区增加。虽然心肌梗死后TRPML1增加而RyR2减少，但总体效应不应干扰邻近连接测定。

上述条件创造了一个微环境，其中溶酶体钙释放可促进更大的舒张期肌浆网钙释放。我们提供了证据，表明RyR2和TRPML1在心肌梗死后接触越来越紧密，心肌梗死后溶酶体钙释放增加，溶酶体钙释放在心肌梗死小鼠心肌细胞中导致舒张期肌浆网钙释放。这些数据与TRPML1在其他细胞类型中诱导内质网/肌浆网钙释放一致。

舒张期肌浆网钙释放已知会导致触发活动和心律失常风险增加，而这里我们表明，通过靶向溶酶体钙释放可以预防心肌梗死后触发活动。与此发现一致，抑制心肌梗死后溶酶体钙释放可在全动物实验中防止心室心律失常诱导。结合我们先前的发现，这些实验表明除肌浆网外的钙循环细胞器对心肌病中的心律失常风险有贡献，这些细胞器的钙释放可能代表一种新的、更有针对性的抗心律失常方法。

虽然我们已表明TRPML1可影响正常和异常自律性，但在没有心肌病的情况下，溶酶体钙释放不会在体内引起触发活动或心律失常，可能是因为溶酶体数量有限、溶酶体钙释放较小以及肌浆网-溶酶体距离较大。这与我们在对照小鼠中改变线粒体钙释放时所看到的情况类似。在两种情况下，我们推测这种不能引起心律失常的原因是细胞器钙通量较少且与肌浆网接触较少，因此尚未创建足够大的微环境来促进舒张期肌浆网钙释放。另一方面，TRPML1对自律性和触发活动的贡献在心肌梗死后引起心律失常方面预计是协同的。

TRPML1转录依赖于TFEB，即自噬-溶酶体途径的主调节因子。增加线粒体活性氧水平激活溶酶体TRPML1通道，引起钙释放。这种释放负责TFEB去磷酸化并转位到细胞核，在那里它导致溶酶体生物发生和TRPML1转录增加。因为线粒体活性氧在缺血性心肌病中增加，这创建了一个正反馈循环，其中上调的TRPML1活性增加TRPML1转录，可能增加TRPML1对心肌梗死后心律失常的影响。

有几个未探索的问题仍然存在。首先，由于TPC2表达在心肌梗死后下调，我们未测试TPC2在心律失常发生中的作用。然而，图5B中的实验表明，心肌梗死后任何TPC2释放可能与TRPML1相比都很小。因为心肌梗死产生氧化应激，TPC2下调与在心室心肌细胞中观察到的氧化还原依赖性溶酶体TPC2下调一致。我们表明线粒体钙释放在非缺血性心肌细胞中起作用，而溶酶体钙释放在缺血性心肌病中起作用。尚不清楚这些细胞器在所有肌病条件下是否具有类似效应。此外，心肌梗死诱导ATP耗竭、内质网应激、炎症、纤维化、线粒体功能障碍和溶酶体激活。所有这些因素都很重要，它们可能协同作用导致心律失常。然而，它们对心律失常的相对贡献仍有待确定。最后，虽然我们发现TRPML1在人类心肌病中增加，但从小鼠实验外推到人类病理学总是具有挑战性。尽管如此，TRPML1在缺血性和非缺血性人类心肌病心室中均增加。

总之，作为钙循环细胞器的典型代表，溶酶体可对缺血性心肌病中的心律失常风险做出贡献。这种贡献的条件包括通过TRPML1增强细胞器钙释放，诱导更大的舒张期肌浆网钙释放，从而导致触发活动并引起心律失常。因此，靶向TRPML1活性和减少心肌梗死后溶酶体钙外流可能代表预防心律失常风险的新治疗靶点。