核磁共振揭示治疗性抗体的位点特异性结构特征,无需同位素标记
单克隆抗体广泛用于治疗癌症和自身免疫性疾病,其安全性和有效性依赖于正确的高阶结构。然而,检测抗体中的细微结构差异一直是重大分析挑战。常规技术如圆二色性或量热法提供有价值的整体信息,但缺乏残基级分辨率。核磁共振波谱是少数能在溶液中以原子分辨率观察蛋白质结构和动力学的技术之一。本研究通过结合氨基酸选择性同位素标记、诱变和多维核磁共振实验,在人类IgG1抗体的Fc区域建立了甲基信号的位点特异性归属。这些归属使得甲基信号能够作为抗体的残基特异性探针,并且即使在不进行同位素标记的抗体中也能检测到相同的信号。利用这些探针,研究人员检测到了与糖基化模式相关的结构差异,包括核心岩藻糖基化和末端半乳糖基化的变化,这两种糖特征已知会影响抗体效应功能。研究还揭示了某些甲基信号来源于抗体的高度动态区域,包括铰链区和受体结合界面的残基,这些信号作为局部结构灵活性的灵敏报告因子,提供了关于分子功能重要区域的见解。由于该方法可以直接分析未标记形式的抗体,它为监测治疗性抗体的结构完整性和细微分子变异开辟了新的可能性,这对于确保生物药物质量和展示生物类似药的结构可比性日益重要。
2026-09-16 12:21:20健康研究