研究概述
本研究描述了一种新建立的患者来源皮肤黑色素瘤（CM）初级细胞系MelT79，该细胞系源自一位初始诊断为IB期CM患者转移病灶。通过多色荧光原位杂交（M-FISH）、高分辨率比较基因组杂交（HR-CGH）和靶向下一代测序技术，研究团队发现MelT79细胞系具有复杂的核型特征，包括CDKN2A/B、SPRED1和B2M等关键基因缺失，同时携带BRAF V600E突变和此前未在CM中报道的RET S649L突变。
临床背景
该患者于2009年确诊右大腿皮肤黑色素瘤（厚度2mm），接受手术切除后维持疾病缓解4年，但2013年起出现皮肤和淋巴结转移，2015年检测到BRAF V600E突变后开始BRAF/MEK抑制剂治疗。至2023年已发生肾上腺、腹壁及多区域转移，先后接受PD-1抑制剂和CTLA-4联合治疗。
建立方法
研究团队在2023年手术切除的腹膜后转移灶中成功建立细胞系。采用机械消化法（避免酶解损伤）结合McCoy's 5A培养基（低酪氨酸浓度），在排除成纤维细胞干扰情况下成功培养。通过定期支原体检测确保培养体系纯净。
基因组特征
M-FISH分析显示MelT79存在从近二倍体（n=8）到近五倍体（n=6）的染色体数目变异，伴有大量非聚集性结构异常（包括染色体内倒位和跨染色体重排）。HR-CGH检测确认9p21（CDKN2A/B）、15q14（SPRED1）和15q21.1（B2M）等位点缺失，这些改变与同源重组修复缺陷相关。
分子特征
NGS检测显示：
- BRAF V600E突变：与患者2015年转移灶一致
- RET S649L突变：在早期转移灶中即存在，提示为肿瘤进展早期事件
- 其他变异（SDHA、PIK3CA等）：仅在FFPE样本中检出，可能为亚克隆事件
值得注意的是，该RET突变在甲状腺髓样癌中已有报道，但在CM中属首次发现，其对靶向治疗和免疫治疗反应的影响有待深入研究。
表型特征
分化标志物
- MITF表达水平：介于G-361和A375之间
- TYRP1高表达：与MITF调控关系一致
- 存在显著的细胞间异质性：MITF表达范围差异达4倍
增殖能力
- 倍增时间：49小时（显著慢于A375等商业化细胞系）
- BrdU掺入率：与分化型MNT-1相当，但低于侵袭型WM115
药物敏感性
- 对BRAF/MEK抑制剂呈中等抗性：
- IC50高于MNT-1
- 低于WM115
- 这种中间表型反映其表型可塑性
重要发现
- RET S649L的治疗意义：该突变持续存在于多个转移灶，可能提供新的靶向治疗机会
- 基因组不稳定性机制：CDKN2A/B缺失导致中心体过度复制，与观察到的染色体异常相关
- 免疫治疗抵抗：B2M缺失可能影响MHC-I抗原呈递，解释PD-1抑制剂疗效不佳
- 表型动态平衡：同时表达分化（TYRP1）和侵袭标志物（MMP3），揭示黑色素瘤进展的复杂性
研究价值
MelT79细胞系为研究CM异质性、治疗抵抗机制（包括RET突变功能）提供了独特模型。其表型可塑性特征（分化与侵袭状态共存）和基因组不稳定性特征，为开发针对肿瘤进化动态的治疗策略提供了实验基础。未来研究需重点探索：
- RET抑制剂在该模型中的疗效
- 基因组不稳定性与表型可塑性的分子关联
- 免疫检查点疗法反应的预测标志物
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